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  WHO关于用于实验室诊断的A/H5型流感病毒感染的人体标本收集的指导方针
日期: 2007年12月07日
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一般信息

呼吸道病毒的诊断取决于高质量标本的采集,并将它们快速运送到实验室以及在进行实验室测试之前采取适当的保存措施。在包含受感染的细胞和分泌物的标本中最易检测到病毒。用于直接病毒抗原或核酸检测的标本以及用于细胞培养分离病毒的标本最好在临床症状出现之后的三天之内采集。

标本的类型 很多的标本适合于上呼吸道病毒感染的诊断: 
1. 鼻拭子
2. 鼻咽拭子
3. 鼻咽呼气
4. 洗鼻液
5. 咽拭子 

除了上呼吸道的拭子之外,对于临床表现有下呼吸道病毒感染的诊断可采用以下一些措施:
1.经气管呼气
2.支气管灌洗 
3.肺组织活检
4.肺或气管组织.

用于实验室诊断的高致病性A/H5 型禽流感病毒的几种比较好的标本依次为:
1. 鼻咽呼气
2. 急性期血清
3. 康复期血清.

通过用免疫荧光法对受到感染的细胞进行病毒抗原的直接检测的标本应当冷冻并在1至2小时内进行。用于商业性测试的标本应当遵照制造商的指导而进行保存。用于病毒分离的标本应当在采集后及时冷冻,并尽可能快地接种到受感染细胞中进行培养。如果标本不能够在48至72小时内进行检测,它们应当在-70ºC或-70ºC之下进行冷冻保存。呼吸道标本应当使用病毒运送介质中进行收集和运送。现在市场上可以购买到能够妥善保存各种病毒的介质。

标本采集的过程所需要的器材 :
1.取痰或粘液器 
2.酯纤维结构的涂药器
3. 塑料瓶•压舌板
4.15-ml 的离心管
5. 采样杯或器皿
6.移液管 

病毒运送介质
(A) 用于收集咽和鼻拭子的病毒运送介质 1. 加入10 g 牛肉汤 和 2 g 牛血清蛋白到的400ml的重蒸馏水中。  2. 加入 0.8 ml 庆大霉素硫酸盐溶液(50 mg/ml) 和 3.2 ml 两性霉素 B (250 µg/ml)  3. 过滤消毒。 
(B) 洗鼻液容器 1. 消毒的盐(0.85% NaCl)。

标本收集的准备工作
临床标本应当遵照以下方针进行收集并装入运送容器中,详见http://webitpreview.who.int/entity/csr/disease/avian_influenza/guidelines/en/Humanspecimens.pdf  。
鼻或鼻咽拭子可入入同一病毒运送介质中。在可能的情况下,以下的信息可填入现场资料收集表中 : 病例的一般情况, 标本的类型, 所收集的资料, 填写此表人的联系方式等。 在此过程中应当一直采取标准预防措施,从病例体上采集标本时实行屏障式保护措施。
鼻拭子:用干的聚酯拭子插入鼻腔中,与上腭平行,并停留几秒钟。然后慢慢地旋转式抽出。用同一拭子采集两侧鼻腔的标本。拭子末端放入有2-3ml的病毒运送介质的瓶中,并将剩余部分折断。
鼻咽拭子:用柔软的、带柄的聚酯拭子插入鼻腔中并至鼻咽部停留几秒钟。然后慢慢地旋转式抽出。另外用一拭子采集另一侧标本。拭子的末端放入含有2-3ml的病毒运送介质的瓶中,并将剩余部分折断 。 
鼻咽呼气:鼻咽部的分泌物通过所连接的导管呼出到一个粘液收集器中,并产生真空。导管与上腭平行插入鼻腔中。产生真空后将导管慢慢地旋转式取出。另一鼻腔的粘液也用同一导管以同样的方式采集。两侧的鼻咽部的粘液收集后,用3ml的运送介质冲洗导管。
洗鼻液:病人坐在舒适的位置,头略微地向后倾斜,并建议在用洗涤液(通常为生理盐水)冲洗鼻腔时让病人说“K”而使其咽部闭合。通过移液管在一侧鼻腔中一次加入1-1.5ml的冲洗液。然后让病人向后仰头,并让冲洗液流入采样杯中。在另一侧鼻腔重复此过程。重复直到一共使用了10-15ml冲洗液。用运送介质中将大约3ml的冲洗液按1:2稀释。
咽拭子:两侧扁桃体以及后咽用拭子用力搽拭,并按上述方式将拭子放入运送介质中。
 
用于流感诊装的血清标本收集
急性期的血清标本(3-5 ml 全血)应当在临床症状出现后立刻采集,并且不能拖延至七天之后。恢复期的血清标本应当在症状出现的14天之后采集。病人临死前 应当采集第二份标本。尽管单份的血清标本不能够在单个病例的诊断中提供结论性的证据,但是在症状出现后两周以上采集的标本,在中和测试中对禽流感抗体的检测是十分有用的。
译自www.who.int

 

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